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挑选婚纱照相框必须了解的小知识

2021-04-01 06:24:21
浏览: 115次 来源:【jake推荐】 作者:-=Jake=-
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本发明涉及合成着色剂检测技术领域,具体是一种食品中合成着色剂的色谱测定方法。

背景技术:

追求外观的美是人的天性,人们对吃的食品也需要装扮。五彩的糖果、诱人的蛋糕、鲜红的糖葫芦,莫不让人垂涎三尺。其实所有这些缤纷多彩的颜色都离不开色素。天然食品在加工保存过程中容易退色或变色,所以人们在加工食品的过程中常添加色素。

色素可以分为天然色素和人工色素,天然色素主要由植物组织中提取,也包括来自动物和微生物的色素,由于天然色素的不稳定性和价格昂贵,食品工业大多使用人工合成色素。

合成色素主要以炼焦油中分离出来的苯胺染料为原料制成,所以统称为炼焦色素或苯胺色素,具有致泻性、致突性(基因突变)、致癌作用,在GB2760标准中对其使用有严格的剂量限制 ,因此准确快速检测合成色素尤其重要。

目前,合成色素的检测方法为GB/T5009.35,虽为2016所修定,但该标准有以下缺陷:一、使用聚酰胺粉吸附,操作繁杂耗费试剂人工强度大;二、由于赤藓红的苯甲酸钠结构不能被聚酰胺粉吸附,因此不能把赤藓红和其他色素一起提取净化,赤藓红不能同步测定,需要用液液萃取后再上机检测;三、最低检出限为0.2~0.5mg/kg,检出浓度高,灵敏度低;四、由于使用聚酰胺粉吸附,样品要逐一提取净化,不适合批量样品检测。五、该标准方法未制定火腿肠、粉肠、香肠等高脂肪的样品检测步骤。

技术实现要素:

本发明的目的在于提供一种食品中合成着色剂的色谱测定方法,该方法能够从食品中一次性提取柠檬黄、苋菜红、酸性靛蓝、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝和赤藓红八种合成着色剂,同步高效地进行液相色谱测定。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:

一种食品中合成着色剂的色谱测定方法,包括以下步骤:

S1、样品提取

称取2g食品样品至离心管中,a)对于液体食品样品,加入乙酸锌溶液和草酸钾/磷酸氢二钾溶液,沉淀蛋白质,再用10%氨水调pH至6,然后用水定容至10 mL,离心处理,得到待净化的样品上清液;b)对于配制酒类样品,加热除去乙醇,用氨水溶液调pH至6,然后用水定容至10 mL,离心处理,得到待净化的样品上清液;c)对于固体食品样品,均质后用氨化甲醇溶液重复提取至提取液无色乐鱼体育 ,合并提取液于60℃水浴蒸发,用水定容至10 mL,离心处理,得到待净化的样品上清液;d)对于肉类样品,均质后石油醚脱脂合成着色剂摘要,再用氨化甲醇溶液重复提取至提取液无色,合并提取液于60℃水浴蒸发,用水定容至10 mL,离心处理,得到待净化的样品上清液;

S2、样品净化

取5 mL步骤S1得到的样品上清液,以1 mL/min的速度通过弱阴离子固相萃取柱,再分别用6 mL pH4水溶液、6 mL pH6水溶液以及6 mL甲醇淋洗弱阴离子固相萃取柱,然后将弱阴离子固相萃取柱通入空气吹干;之后用6 mL氨化甲醇洗脱并收集,60℃水浴氮气吹干,再加1 mL水复溶,混匀,上清液为样品溶液,供液相色谱分析;

S3、配置人工着色剂混合标准应用液

准确移取适量0.5 mg/mL柠檬黄标准储备液、0.5 mg/mL苋菜红标准储备液、0.5 mg/mL胭脂红标准储备液、0.5 mg/mL日落黄标准储备液、1.0 mg/mL诱惑红标准储备液、0.5 mg/mL亮蓝标准储备液、1.0 mg/mL赤藓红标准储备液以及0.5 mg/mL酸性靛蓝标准储备液,并用水配制成0.2 µg/mL、0.5 µg/mL、2.0 µg/mL、5.0 µg/mL、10 µg/mL和20 µg/mL的系列人工着色剂混合标准应用液;

S4、将步骤S3配置的人工着色剂混合标准应用液注入液相色谱仪测定,液相色谱测定条件为:色谱柱:C18,4.6 × 250 mm,5 μm;流动相:A为乙酸铵溶液,B为甲醇;流速:1.0 mL/min;柱温:30℃;进样量:20 µL;梯度洗脱程序:0.0~5.0min,80%A~65%A和20~35%B;5.0~12.0min,65%A~20%A和35~80%B;12.0~16.0min, 20%A和80%B;16.0~17.0min, 20%A~80%A和80~20%B;17.0~20.0min, 80%A和20%B;检测波长:柠檬黄428mm、苋菜红521mm、酸性靛蓝608mm、胭脂红509 mm、日落黄483 mm、诱惑红507 mm、亮蓝625 mm以及赤藓红529 mm;得到八种人工合成着色剂的液相色谱图和峰面积,绘制标准系列的线性方程;

S5、将步骤S2得到的样品溶液注入液相色谱仪测定,液相色谱测定条件与步骤S3相同,得到样品色谱峰,保留时间定性;样品峰面积带入标准系列的线性方程,计算出目标化合物的浓度,外标法定量;

S6、根据公式计算八种人工合成着色剂的含量;上式中X 为样品试样中目标化合物含量, C为由标准的线性方程得到的样品试样溶液中目标化合物含量, V 为样品试样的最终定容体积, m为样品试样的质量, f 为样品试样稀释倍数;以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字。

本发明的有益效果是:弱阴离子固相萃取柱填料在中性条件下吸附赤鲜红,酸性条件下吸附其他合成着色剂,在碱性条件下解吸附所有合成着色剂的特性,可以一次性提取净化8种人工合成着色剂,且应用了全自动固相萃取仪,可以自动批量处理样品,耗费试剂少,减少人工劳动量;用二极管阵列检测器代替紫外检测器,全波长扫描亚博全站 ,每种色素对应最佳波长,最低检出限达到0.025mg/kg,灵敏度比原方法高出5~10倍;该方法快速简便、灵敏度高、干扰少、结果准确、重现性好,能较好地应用于实际食品样品的检测。

附图说明

下面结合附图和实施例对本发明进一步说明:

图1是本发明八种人工合成着色剂标准色谱图。

具体实施方式

本发明提供一种食品中合成着色剂的色谱测定方法,适用于食品中柠檬黄、苋菜红、酸性靛蓝、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝和赤藓红八种合成着色剂高效液相色谱测定;

本方法中柠檬黄、苋菜红、酸性靛蓝、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝和赤藓红的检出限为:0.025 mg/kg,定量限为:0.075 mg/kg。

为了更加方便地描述本发明,在此先将本发明所使用的试剂列出,除特别注明外,本实施例所用试剂均为分析纯,水为符合GB/T 6682规定的一级水;

3.1甲醇(CH3OH):色谱纯;

3.2 氨水(NH3•H2O);

3.3 柠檬酸(C6H8O7•H2O);

3.4 乙酸锌(C4H6O4Zn•2H2O);

3.5 乙酸铵(CH3COONH4):优级纯;

3.6 草酸钾(C2O4K2•H2O);

3.7 磷酸氢二钾(K2HPO4);

3.8 石油醚(30℃~60℃);

3.9 乙酸锌溶液(1.0 mol/L):称取22 g乙酸锌(3.4),用水溶解并定容至100 mL,混匀;

3.10 草酸钾/磷酸氢二钾溶液:称取3.0 g草酸钾(3.6)和7.0 g磷酸氢二钾(3.7),用水溶解并定容至100 mL,混匀;

3.11 柠檬酸溶液:称取20g柠檬酸(3.3),用水溶解并定容至100 mL,混匀;

3.12 氨水溶液(10%):取10 mL氨水(3.2),用水定容至100 mL,混匀;

3.13 pH4水溶液:水加柠檬酸溶液(3.11)调pH值至4;

3.14 pH6水溶液:水加柠檬酸溶液(3.11)调pH值至6;

3.15 氨化甲醇溶液(3%):取3 mL氨水(3.2)加入到97 mL甲醇(3.1)中,混匀;

3.16 乙酸铵溶液(0.02 mol/L):称取1.54 g乙酸铵(3.5),用水溶解并定容至1000 mL,混匀,过0.45 µm滤膜;

3.17 标准品:柠檬黄标准储备液(0.5 mg/mL)、苋菜红标准储备液(0.5 mg/mL)、胭脂红标准储备液(0.5 mg/mL)、日落黄标准储备液(0.5 mg/mL)、诱惑红标准储备液(1.0 mg/mL)、亮蓝标准储备液(0.5 mg/mL)和赤藓红标准储备液(1.0 mg/mL)(购自中国计量科学研究院),酸性靛蓝固体标准品(纯度≥99.9%,购自Dr. Ehrenstorfer公司);

3.18标准溶液配置:

3.18.1 酸性靛蓝标准储备液(0.5 mg/mL):准确称取适量酸性靛蓝固体标准品(3.17),用水溶解并定容,混匀;

3.18.2 混合标准应用液(100 µg/mL):分别移取适量合成着色剂标准储备液(3.17和3.18.1),用水定容,混匀;

3.18.3 混合标准系列:准确移取适量混合标准应用液(3.18.2),用水配制成0.2 µg/mL、0.5 µg/mL、2.0 µg/mL、5.0 µg/mL、10 µg/mL和20 µg/mL的混合标准系列。

结合图1所示,本发明具体包括以下步骤:

S1、样品提取

称取2g食品样品至离心管中,a)对于液体食品样品,例如液体饮料、液体调味料和果汁等,加入乙酸锌溶液和草酸钾/磷酸氢二钾溶液凤凰彩票登录 ,沉淀蛋白质,再用10%氨水调pH至6,然后用水定容至10 mL,4000 r/min离心10 min,得到待净化的样品上清液;

b)对于配制酒类样品,加热除去乙醇,用氨水溶液调pH至6,然后用水定容至10 mL,4000 r/min离心10 min,得到待净化的样品上清液;

c)对于固体食品样品,例如蜜饯、糖果、果冻、水果罐头、玉米粉、小米、小米粉等,均质后用氨化甲醇溶液重复提取至提取液无色,合并提取液于60℃水浴蒸发,用水定容至10 mL,10000 r/min离心3 min,得到待净化的样品上清液;

d)对于肉类样品,例如火腿肠、香肠、粉肠等,均质后石油醚脱脂,再用氨化甲醇溶液重复提取至提取液无色,合并提取液于60℃水浴蒸发,用水定容至10 mL,离心处理,得到待净化的样品上清液;

S2、样品净化

取5 mL步骤S1得到的样品上清液,以1 mL/min的速度通过弱阴离子固相萃取柱亚博app安全有保障 ,再分别用6 mL pH4水溶液、6 mL pH6水溶液以及6 mL甲醇淋洗弱阴离子固相萃取柱,然后将弱阴离子固相萃取柱通入空气吹干;之后用6 mL氨化甲醇洗脱并收集,60℃水浴氮气吹干,再加1 mL水复溶,混匀,上清液为样品溶液,供液相色谱分析;

S3、配置人工着色剂混合标准应用液

准确称取0.5 mg/mL柠檬黄标准储备液、0.5 mg/mL苋菜红标准储备液、0.5 mg/mL胭脂红标准储备液、0.5 mg/mL日落黄标准储备液、1.0 mg/mL诱惑红标准储备液、0.5 mg/mL亮蓝标准储备液、1.0 mg/mL赤藓红标准储备液以及0.5 mg/mL酸性靛蓝标准储备液,并用水配制成0.2 µg/mL、0.5 µg/mL、2.0 µg/mL、5.0 µg/mL、10 µg/mL和20 µg/mL的系列人工着色剂混合标准应用液;

S4、将步骤S3配置的人工着色剂混合标准应用液注入液相色谱仪测定,液相色谱测定条件为:

色谱柱:C18,4.6 × 250 mm,5 μm;

流动相:A为乙酸铵溶液,B为甲醇;

流速:1.0 mL/min;柱温:30℃;

进样量:20 µL;检测器:二极管阵列检测器(PDA)或者紫外检测器(TUV);

梯度洗脱程序:见表1

表1 梯度洗脱程序

八种合成着色剂检测波长:见表2

表2八种合成着色剂检测波长

得到八种人工合成着色剂的液相色谱图和峰面积,绘制标准系列的线性方程;

S5、将步骤S2得到的样品溶液注入液相色谱仪测定,液相色谱测定条件与步骤S3相同,得到样品色谱峰,保留时间定性;样品峰面积带入标准系列的线性方程,计算出目标化合物的浓度,外标法定量;

S6、根据公式 计算八种人工合成着色剂的含量;上式中X 为样品试样中目标化合物含量, C为由标准的线性方程得到的样品试样溶液中目标化合物含量, V 为样品试样的最终定容体积, m为样品试样的质量, f 为样品试样稀释倍数;以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字。

为了获得更加准确的测定结果,可以对本发明所用的检查试剂、实验用水等注入液相色谱仪进行空白试验,如果含有检测物质,要在计算结果中扣除,或者重新配置新的试剂和实验用水。

柠檬黄等大多数合成着色剂为苯磺酸钠结构,酸性条件下能被聚酰胺粉吸附,而赤藓红为苯甲酸钠结构,酸性条件不能被聚酰胺粉吸附。本方法使用弱阴离子固相萃取柱,可以同时测定柠檬黄、苋菜红、酸性靛蓝、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝等苯磺酸钠结构和赤藓红等苯甲酸钠结构的合成着色剂。

弱阴离子固相萃取柱的填料结构表明:当溶液pKa大于-NH2的pKa两个单位时,填料中的-NH2就以铵根离子的阳离子状态存在,此时它就可以吸附一些以阴离子状态存在的目标物;而当pKa小于-NH2的pKa两个单位时,铵根离子以-NH2状态存在,阴离子目标物就会解吸附合成着色剂摘要,被一定的溶剂洗脱下来;因此银河体育官网 ,上样前将样品提取液pH调至6左右,是保证弱阴离子固相萃取柱对苯磺酸钠结构和苯甲酸钠结构的合成着色剂均有吸附作用,最后用氨化甲醇溶液(3%)将待测物洗脱出来。

洗脱前吹干小柱是为了将水分吹干,防止后面氮吹时间过长,且如果有过多水分存在,会稀释后面的氨化甲醇,使甲醇的浓度降低,洗脱效果会受影响。

净化过程中为保证上样、淋洗和洗脱的效果,流速控制在不大于1mL/min。

因为多种合成着色剂能被再生纤维素等水系滤膜吸附,因此不能使用滤膜过滤样品,如果样品溶液浑浊,可4000 r/min离心10 min,上清液上机测定。

用紫外检测器检测时,可选择切换波长模式,使八种合成着色剂的最大吸收峰呈现在一张图谱上。

以上所述,仅是本发明的较佳实施例而已,并非对本发明作任何形式上的限制;任何熟悉本领域的技术人员,在不脱离本发明技术方案范围情况下,都可利用上述揭示的方法和技术内容对本发明技术方案做出许多可能的变动和修饰,或修改为等同变化的等效实施例。因此,凡是未脱离本发明技术方案的内容,依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改、等同替换、等效变化及修饰,均仍属于本发明技术方案保护的范围内。

老王


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